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器官移植类动物模型

器官移植类动物模型主要用于移植排斥反应中抗排斥药物研究、移植免疫研究、肿瘤研究、 缺血再灌注研究、细胞浸入研究等。器官移植后能否成功地克服机体的排斥反应成为器官移 植成败的关键。器官移植术后的患者需服用抗排斥药物或免疫抑制剂,延缓急性排斥、慢性 排斥出现的时间,进一步延长供体器官的使用年限。运用大小鼠动物模型,行器官移植术, 为筛选抗排斥药物、免疫抑制剂提供了便利条件。

巴菲尔生物拥有SPF级动物实验平台,能为广大科研用户提供器官移植类动物模型,以及 动物实验外包技术服务。在器官移植类动物模型中,巴菲尔可以提供下表中的技术服务,欢 迎大家在线及电话咨询相关服务资讯。

大鼠原位肝移植模型 大鼠肾脏移植模型 大鼠同种异体颈部心脏移植模型 小鼠心脏移植慢性排斥反应模型
小鼠肝脏移植模型 小鼠肾脏移植模型 小鼠颈部节段性胰腺移植模型 小鼠异位节段性小肠移植模型
案例一:大鼠原位肝移植模型
动物案例

供体:Lewis大鼠、DA大鼠;

受体:BN大鼠

造模方法

二袖套一吻合法(门静脉和肝下下腔静脉行袖套法,肝上下腔静脉行吻合法)

供肝的获取

腹采用10%水合氯醛腹腔麻醉(0.3ml/100g),十字切口入腹,离断肝脏镰状韧带,将小肠移出腹腔外,以生理盐水纱布覆盖。游离胃小弯背腹侧的尾状叶盘状乳头突,近肝侧结扎并离断左膈下静脉,结扎并切断左肝至食管高位血管支,结扎右肾上腺静脉丛,并切断右肾动静脉。游离肝下下腔静脉至左肾静脉上缘,游离肝外胆管并行胆管内插管,经门静脉主干向肝脏内灌注含肝素50U的4℃生理盐水10ml,行肝脏冷灌注。当肝脏变白时,在靠近左肾静脉入口处剪断肝下下腔静脉,形成灌注液流出道,在膈肌上方横断肝上、下腔静脉,将供肝取出,置于4℃生理盐水内。

血管袖套制备

在4℃生理盐水中将门静脉与肝下下腔静脉壁外翻,分别套在外径2.10mm和2.76mm的聚乙烯管上,用5-0丝线环扎固定,完成袖套制备。

受体手术

大鼠麻醉后,上腹部直切口入腹,分步游离受体肝脏,游离完毕后将受体肝脏取出。将供肝自生理盐水保存液中取出置于受体原位,冰生理盐水纱布覆盖肝脏表面,以预置的7-0无损伤线吻合肝上、下腔静脉,吻合时,受体侧连同膈肌环一并缝合,先缝合后壁,从左侧开始,将缝线从血管外缝入腔内,在腔内连续缝合。针距控制在1mm,至右侧角时,将缝线穿出血管壁,在血管腔外与右侧角缝线打结。以同一缝线从右侧角连续缝合血管前壁,接近左侧角时,向肝上、下腔静脉内注入4℃生理盐水,驱出血管腔内的空气,至左侧角时,与原缝线打结。以弯血管夹在吻合口近肝侧钳夹肝上、下腔静脉,更换下小儿Satinsky心耳钳,检查吻合口是否出血。吻合成功后,经门静脉向供肝内灌注4℃生理盐水10ml,排除肝内的肝素盐水,夹闭肝下下腔静脉,将供肝门静脉套管插入受体门静脉内,开放门静脉及肝上、下腔静脉阻端夹,结束无肝期。肝下下腔静脉的吻合方法与门静脉相同,最后将供体胆管插入受体胆管插管内,按层缝合腹壁。

模型鉴定1

大鼠肝脏移植 供肝缝合完毕准备“套袖”连接血流结束无肝期

造模周期

约1h一对

模型成功率

95%以上

病理鉴定及图片
  • HE染色×100倍同种异体移植
    HE染色×100倍同种异体移植
案例二:小鼠肾脏移植模型
动物案例

57BL/6、BALB/C

造模方法

血管吻合采用供受体腹主动脉和下腔静脉端-侧连续缝合,尿路重建采用供受体输尿管端-端吻合

供体手术

腹部正中切口,选择左肾作为供肾,显露左肾及血管,游离左肾血管下方1.0~1.2cm处的腹主动脉及下腔静脉,结扎并剪断其侧支和左侧精索动静脉、左肾上腺动静脉,游离左肾及输尿管,阻断远心端腔静脉和腹主动脉,于左肾血管上方分别结扎阻断腹主动脉和下腔静脉,并在左肾血管下方约5mm处剪断下腔静脉,以使灌注液从此处流出,6号套管针穿刺腹主动脉远端,拔取针芯,低压、匀速(0.8~10ml/min)注入10~15ml4℃的H-CA液,直至从下腔静脉流出清凉的灌注液和左肾变为黄白色为止。灌注完毕,在结扎线以上剪断腹主动脉和腔静脉,在左肾输尿管中段剪断输尿管。此时左肾、血管及输尿管均已完全游离,将左肾及其附带的血管、输尿管放入4℃H-CA液中保存。

受体手术

腹部正中切口,肠管右置,盐水纱布覆盖,充分暴露左肾及血管。将4℃肝素盐水2ml(50U/ml)注入右侧腹膜后进行全身肝素化。以5/0的线结扎肾蒂,行包膜下肾切除。游离左肾动脉下方1.0~1.2cm处的腹主动脉和下腔静脉,并结扎其所有的侧支,在腹主动脉的预计吻合口处,仔细剪去部分血管外膜,以备血管吻合。在受体大鼠腹部左侧,将供肾放在两层冰棉片之间,维持供肾的低温状态。分别在左肾血管下方和髂血管水平处用阻血夹阻断下腔静脉和腹主动脉的血流。判断确无血液回流后,将下腔静脉和腹主动脉分别纵向剪开一与供体血管口径相吻合的小口,长约4~6mm。在6~10倍手术显微镜视野下,先吻合动脉后吻合静脉,第1针从12点的位置开始,用9/0线做连续吻合血管右侧壁直至6点位置,然后连续吻合左侧壁,每侧缝6~7针,以同样的方法吻合下腔静脉。吻合结束后,开放阻血夹,可见供肾迅速转红,肾动脉有明显搏动,肾静脉充盈。如果吻合口有渗血,轻压2~3min,不要随便加针,以免造成吻合口狭窄。

尿路重建

血管吻合成功后,观察2~3min,见供肾输尿管蠕动并有清亮的尿液流出时开始重建尿路。在平受体左肾下极水平处锐性游离受体输尿管并剪断,修剪供体输尿管至合适长度,肝素盐水冲洗断端。25倍显微镜视野下,用11/0的显微手术缝线两定点法间断1~2针吻合输尿管前壁,以两定点牵引线翻转至输尿管后壁,间断1~2针吻合供受体输尿管后壁,完成尿路重建后,观察吻合口有无狭窄和血栓,若输尿管蠕动正常,将肠管左置,肾包膜下行受体右肾切除。

关腹

腹腔无出血渗血及棉球滞留后,将肠管复位。将肝素盐水2~4ml注入腹腔,以补充受体体液丢失并防止血栓形成。用1/0线腹壁分层连续缝合关腹。

模型鉴定1 模型鉴定2
造模周期

约1h一对

模型成功率

90%

病理鉴定及图片
  • 病理
    病理
  • 红色标注CD4
    红色标注CD4
案例三:小鼠心脏移植慢性排斥反应模型
动物案例

C57BL/6、BALB/C

造模方法

供心准备:

(1) 0.5%戊巴比妥钠麻醉同种或同系小鼠,75%酒精消毒皮肤;

(2) 腹部正中切口约2cm,找到下腔静脉并注入50U/mL的肝素1mL;

(3) 最快时间打开胸腔,暴露手术视野,心脏部位填塞生理盐水冰块使其停跳;

(4) 用5-0号线结扎心脏的上下腔静脉(同时结扎右心耳),剪刀离断;

(5) 找到主动脉弓,离断主动脉;在肺动脉背侧伸入剪刀,离断肺动脉;

(6) 用5-0号线将所有肺静脉及其他组织(包括左心耳)结扎;

(7) 离断所有血管,游离心脏,放4℃含肝素的生理盐水中保存备用。

模型鉴定1

受者准备:

(1) 小鼠由0.5%戊巴比妥钠麻醉后,75%酒精消毒皮肤;

(2) 腹部正中切口约2.5cm,暴露手术视野,肠袢推行至右侧,用生理盐水浸泡的无菌纱布覆盖;

(3) 游离腹主动脉和下腔静脉,必要时11-0号丝线结扎主动脉上腰静脉,5-0号丝线先打活结结扎血管近心端,后结扎血管远心端;

(4) 用维纳斯剪在腹动脉前壁剪一纵型开口,与供心主动脉口径一致,用含肝素的生理盐水冲洗切口;

模型鉴定1

(5) 取出供心置于受者腹腔中,将主动脉与腹主动脉对齐,冰生理盐水棉片覆盖保护供心,11-0号丝线连续缝合;

(6) 随后用维纳斯剪在下腔静脉前壁剪一纵型开口,将肺动脉与下腔静脉对齐,如同动脉缝合一般行血管侧断端吻合;

(7) 先松开远心端结扎线,如有渗血,小棉球压迫止血。后松开近心端结扎线,心脏变红,继而恢复搏动;

(8) 无渗血后,将肠管放回腹腔,5-0号线缝合关闭腹腔;

(9) 将小鼠置于温暖的环境下,待其自然苏醒。

造模周期

约1h一对

模型成功率

95%以上

病理鉴定及图片
  • 病理
    病理

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